图文来源：中华实验眼科杂志
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朱莉,苗恒,胡钦瑞,等.不同眼内灌注液对视网膜组织学及功能的影响[J].中华实验眼科杂志,,39(11):-.DOI:10./cma.j.cn--.
目的比较不同眼内灌注液对视网膜组织学及功能的影响。
方法取人角膜内皮细胞(HCEC)、人视网膜色素上皮(HRPE)细胞和大鼠视网膜神经节细胞(RGC)，分为正常对照组、平衡盐灌洗液(BSS)组和复方电解质眼内灌注液(CEIIS)组，分别在含体积分数10%DMEM/F12培养基、BSS和CEIIS中培养12、24、48h，采用细胞计数试剂盒8(CCK8)法测定培养细胞的增生A值；采用细胞免疫荧光染色法检测培养细胞中凋亡相关蛋白表达；采用流式细胞术测定细胞凋亡率和细胞周期；采用乳酸脱氢酶(LDH)和琥珀酸脱氢酶(SDH)定量检测试剂盒检测细胞线粒体损伤。选用新西兰大耳白兔15只，采用抽签法随机分为对照组3只、BSS组6只和CEIIS组6只，均取左眼行玻璃体切割术，术中根据分组方法分别采用不同的眼内灌注液。分别于术前和术后24h采用闪光视网膜电图(ERG)测定术眼视网膜功能，采用光相干断层扫描(OCT)检测实验眼视网膜各层结构变化。收集各时间点术眼眼球，采用TUNEL染色法检测视网膜各层细胞的早期凋亡情况；采用免疫组织化学染色法检测视网膜组织中细胞色素C和bax蛋白表达情况；透射电子显微镜下观察实验眼视网膜超微结构变化。
结果BSS组和CEIIS组3种培养细胞均有不同程度的损伤，随培养时间延长，细胞增生减少，凋亡细胞数量增加；与BSS组相比，CEIIS组培养细胞排列致密整齐，细胞形态和大小均一。BSS组HRPE细胞和RGC的细胞凋亡率分别为(37.±6.)%和(29.±12.)%，明显高于CEIIS组的(4.±1.)%和(6.±1.)%，差异均有统计学意义(P＝0.、0.)。正常对照组、BSS组和CEIIS组间HCEC和HRPE细胞的G0/G1+S期比例总体比较，差异均无统计学意义(HCEC：F＝2.，P＝0.；HRPE：F＝2.，P＝0.)；BSS组RGC的G2/M分裂阻滞期比例高于正常对照组和CEIIS组，差异均有统计学意义(P＝0.、0.)。各培养时间点CEIIS组HCEC、HRPE细胞和RGC的增生A值均明显高于BSS组，差异均有统计学意义(均P0.05)。BSS组各细胞中细胞色素C、bax、caspase-3和caspase-9荧光强度强于正常对照组和CEIIS组，bcl-2荧光强度弱于CEIIS组，闭锁小带蛋白(ZO-1)荧光强度弱于正常对照组和CEIIS组。不同时间点BSS组各细胞LDH释放水平均明显高于CEIIS组(均P0.)；培养48h时，BSS组各细胞SDH释放水平高于CEIIS组，差异有统计学意义(均P0.05)。2个组兔眼玻璃体切割术后OCT检查均未见视网膜组织学异常，但透射电子显微镜检查显示2个组术后均出现不同程度的视网膜感光层细胞排列疏松、光感受器外节膜盘大量脱落、空泡变性等，以BSS组更为严重。TUNEL染色显示术后凋亡细胞主要位于视网膜内核层和RGC层，BSS组视网膜细胞凋亡数为(.2±22.8)个/高倍视野，明显高于CEIIS组的(81.3±17.7)个/高倍视野，差异有统计学意义(t＝4.，P＝0.)。全视野闪光ERG检查显示，CEIIS组术眼术后24h暗视3.0ERGa波、b波振幅较术前有所下降，但差异均无统计学意义(均P0.05)，BSS组术眼术后24h暗视3.0ERGa波、b波振幅较术前显著下降，差异均有统计学意义(P＝0.、0.)。
结论与BSS比较，玻璃体切割术中眼内灌注CEIIS在体内、体外实验中对视网膜组织和功能损伤均较小。
玻璃体切割术；灌注液；细胞活性；视网膜功能；细胞凋亡；氧化应激
基金项目：国家重点基础研究发展计划项目（CB）；国家自然科学基金项目（）
DOI:10./cma.j.cn--
玻璃体切割术中改进眼内灌注液可以更好地保护视网膜组织结构并改善视网膜功能[1-3]，减少对视网膜色素上皮细胞和角膜内皮细胞的损伤。眼组织的新陈代谢有赖于眼内液体成分及其作用，如O2、pH和渗透压等。将无菌平衡盐灌洗液(balancedsalinesolution，BSS)与改良无菌BSS(必施佳)对眼组织的影响进行比较发现，兔眼玻璃体切割术中应用乳酸林格液对术后视网膜电图(electroretinogram，ERG)的a波、b波振幅低于正常值所持续的时间比BSS和改良BSS更长[4]，推测乳酸林格液的低pH、高乳酸水平和低渗透压可能对视网膜细胞产生永久性的损伤。还有研究发现，玻璃体切割术后早期病变主要发生在视网膜内，包括视网膜的各层缺损或脱离、视神经纤维层外露、内丛状层水肿和层厚增加等[5-7]，因此术眼术后视力恢复可能与术中灌注液介导的细胞内环境变化有关。葡萄糖是眼内灌注液中的重要组成成分，是维持视网膜正常功能的必要元素。复方电解质眼内灌注液(
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